确诊视网膜母细胞瘤主要依据眼底检查、影像检查及其他检查。眼底检查可评估肿瘤风险。影像检查B超检查，可以鉴别早期肿瘤和晚期肿瘤。CT检查，可判断肿瘤是否向颅内蔓延，以及判断视神经及眼球侵犯的情况。磁共振检查，可以较好的观察球后视神经有无增粗，相比CT无放射性。其他检查术后病理检查：明确眼底肿瘤性质，视网膜母细胞瘤对分化程度，以及有无突破眼球壁，视神经断端有无肿瘤细胞浸润。指导下一步治疗。荧光眼底血管造影：可指导分期。前房细胞学检查：作为光化学治疗前明确诊断及治疗后疗效观察的指标。尿化验：当尿中香草扁桃酸和高香草酸阳性时有助于诊断，但阴性仍不能排除肿瘤。乳酸脱氢酶的活力测定：有强烈提示视网膜母细胞瘤的可能。